蛋白提取液(哺乳动物)

产品货号：

YTB4070

中文名称：

蛋白提取液(哺乳动物)

英文名称：

BalbLytic Mammalian Active Protein Extraction Reagent

产品规格：

100mL

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本产品是一种用于快速、高质量、高产量、高活性提取哺乳动物细胞或组织的细胞浆蛋白、细胞核蛋白以及膜蛋白的活性蛋白抽提试剂。

本产品是一种含有特定的经过精心筛选以确保蛋白抽提效果良好的比较温和的非变性去垢剂(detergent)的缓冲液(pH7.6)，既确保了蛋白能被高效抽提，抽提效果和百奥莱博的WB及IP细胞裂解液(货号：YT038)或RIPA裂解液(强，货号：YT609)相近，又能确保提取获得的蛋白样品中蛋白或酶的活性能被很好地保留，便于进行后续的蛋白活性分析检测。

由于本产品能确保提取的蛋白样品的活性，所含的去垢剂比较温和，虽然对于膜蛋白也有很好的抽提效果，但对于一些难溶性蛋白的抽提效率相对较低。如果希望获得比较高的难溶性蛋白的得率，建议使用含有强去垢剂的适当抽提试剂。对于使用本产品抽提获得的蛋白溶液，如果希望去除其中的去垢剂，可以通过透析或超滤方法去除。

本产品能够快速、温和、有效地抽提哺乳动物细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。例如，免疫印迹(Western blot)、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)和ELISA等常规生化分析，luciferase、β-gal、alkaline phosphatase、chloramphenicol acetyltransferase (CAT)等报告基因酶活性检测，PKA、PKC和酪氨酸激酶(tyrosine kinase)等蛋白激酶活力的检测，以及带有HA、Flag、Myc、V5、His和GST等标签蛋白的分离纯化等方面的用途。

产品组成

组分	规格
BalbLytic哺乳动物活性蛋白抽提试剂	100mL
说明书	1份

保存：室温，有效期2年。

注意事项

抽提蛋白样品的所有步骤都宜在冰上或4℃进行，以保证蛋白的活性。
可以根据需要在抽提试剂中添加适当的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂等。例如总体效果比较理想的通用型蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号：YTB4015)，或者根据具体用途选择通用型蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(质谱兼容，货号：YTB4017)、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品专用，货号：YTB4018)，或成本比较低的蛋白酶抑制剂100mM PMSF(货号：YT615)。如果无需检测磷酸化蛋白，也可以选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂混合物。
可以考虑选购BalbZonase超级核酸酶(货号：YTB4421、YTB4423)，并添加到本产品中以降低抽提产物的粘稠度。
抽提His标签重组蛋白如果后续用于镍柱等的纯化，通常应避免加入含EDTA的试剂。因为EDTA会破坏大多数的金属螯合纯化介质(例如Ni-NTA纯化介质)，但百奥莱博的His-tag Purification Resin (耐还原螯合型)(货号：YT616、YT046)可与EDTA兼容，因而在抽提试剂中含有EDTA仍然可用于含有His标签的蛋白纯化。

溶液的准备
- 取适量的BalbLytic哺乳动物活性蛋白抽提试剂，根据具体实验目的加入适量的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂(例如百奥莱博的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品专用，货号：YTB4018)、通用型蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号：YTB4015)或通用型蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(质谱兼容，货号：YTB4017)，也可以根据实验目的选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂混合物。放置于冰浴备用。如有必要，可以考虑选购BalbZonase超级核酸酶(货号：YTB4421、YTB4423)，并添加到本产品中使最终浓度为50U/ml以降低抽提产物的粘稠度。

贴壁细胞的蛋白抽提

洗涤细胞(可选做)：吸除细胞培养液，加入适量PBS，轻轻摇动，吸除PBS。
注意：可根据具体情况，选择洗涤与否。如果培养液和培养液中添加的药物不会影响后续的实验，可以不进行细胞洗涤。如果影响比较大，就需要再重复洗涤一次。

裂解细胞：吸净细胞培养液或洗涤液，加入适量的BalbLytic哺乳动物活性蛋白抽提试剂，冰上孵育2～10min，具体用量参照表1。加入抽提试剂后会发现，细胞接触抽提试剂后会立即发生裂解。根据不同的细胞类型和实验目的，可以随即进入后续步骤，或者在冰上继续孵育2～20min (如有必要也可以在摇床上冰浴以进一步改善抽提效果)，以让细胞充分裂解。对于常规的检测，抽提试剂加入后无需额外的孵育，如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。额外的孵育时间，可能会增加10～50%不等的蛋白得率，不同的细胞会有所不同。
表1.不同规格的细胞培养器皿中百奥莱博BalbLytic哺乳动物活性蛋白抽提试剂的用量表。

Multiple Well Plates or Dishes	Growth area (cm²)*	Volume of Extraction Reagent (μl)
10-cm dish	55	500-1000
6-cm dish	21	200-400
6-well plate	9.5	100-200
12-well plate	3.8	50-100
24-well plate	1.9	25-50
48-well plate	0.95	12.5-25
96-well plate	0.32	5-10

用移液器将细胞抽提产物吹打悬起并转移到离心管中，14000g 4℃离心5～10min。
将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。

悬浮细胞的蛋白抽提
- 收集细胞：将细胞2500g 4℃或室温离心10min，弃上清。
- 洗涤细胞(可选做)：用PBS洗涤细胞，2500g 4℃或室温离心10min，弃上清。
- 裂解细胞：弹击离心管底，使细胞沉淀适当分散开。参考表1，加入适量冰浴预冷的BalbLytic哺乳动物活性蛋白抽提试剂，适当混匀并冰上孵育2～10min，以裂解所有的细胞。加入抽提试剂后会发现，细胞接触抽提试剂后就会立即发生裂解。根据不同的细胞类型和实验目的，可以随即进入后续步骤，或者在冰上继续孵育2～20min (如有必要也可以在摇床上冰浴以进一步改善抽提效果)，以让细胞充分裂解。对于常规的检测，裂解液加入后无需额外的孵育，如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。额外的孵育时间，可能会增加10～50%不等的蛋白得率，不同的细胞会有所不同。
- 14000g 4℃离心5～10min。
- 将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。
组织的蛋白抽提
- 组织的处理：把组织剪切成细小的碎片，或液氮冷冻后研磨成粉末。
- 匀浆和抽提：按照每20mg组织加入200～400μL抽提试剂的比例加入BalbLytic哺乳动物活性蛋白抽提试剂，用玻璃匀浆器匀浆，或使用组织研磨仪研磨，直至充分裂解。
- 冰上孵育2～10min。根据不同的组织类型和实验目的，可以随即进入后续步骤，或者在冰上继续孵育2～20min (如有必要也可以在摇床上冰浴以进一步改善抽提效果)，以让组织充分裂解。对于常规的检测，匀浆后无需额外的孵育，如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。
- 14000g 4℃离心5～10min。
- 将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。

抽提蛋白产量低。
- 细胞或组织裂解不充分。延长冰上孵育时间或在孵育期间适当摇动，或适当增加蛋白抽提试剂的使用量。
- 蛋白发生降解。加入蛋白酶抑制剂可抑制蛋白降解。
- 组织匀浆不太充分。适当延长匀浆或研磨时间。
- 蛋白溶液的粘稠度太高。一方面可以考虑加大抽提试剂的用量，另一方面可以考虑添加BalbZonase超级核酸酶(货号：YTB4421、YTB4423)等以降低粘稠度
外源表达蛋白量偏少或检测不到。
- 外源蛋白表达量低。考虑优化细胞质粒转染或病毒感染的操作流程。
- 质粒或病毒有误。考虑设置适当的阳性对照，并对质粒或病毒包装质粒进行测序和核对，并对表达效果进行测试和验证。

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